Abstraktní
Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti dodecylsulfátu sodného (SDS-PAGE) je velmi běžnou technikou používanou pro analýzu komplexních směsí polypeptidů. Má velké rozlišovací schopnosti, je rychlý a je vhodný pro bílkoviny kyselého nebo zásaditého pí. Poslední je, protože protein reaguje s SDS, který se váže na protein v přibližném poměru 1∶4∶1 (SDS: protein, w/w) a propůjčuje komplexu SDS-protein negativní náboj. Nabité komplexy se pohybují směrem k anodě, když jsou umístěny v elektrickém poli, a jsou odděleny na základě rozdílů v náboji a velikosti. SDS-PAGE se běžně používá k odhadu molekulových hmotností proteinů, ale odhady jsou přibližné (označují se jako „zjevné molekulové hmotnosti“) a někdy jsou náchylné k výrazné chybě.
Například k nepřiměřeně velkému zvýšení zjevné molekulové hmotnosti může dojít při kovalentní fosforylaci proteinu ( 1 ) nebo při umělém zachycení kyseliny fosforečné ( 2 ). Většina návrhů SDS-PAGE používá „stohovací gel“. Takový systém umožňuje koncentraci vzorků ze srovnatelně velkých objemů do velmi malých zón v gelu, čímž se získají úzké pásy různých proteinů, které jsou pak lépe rozlišeny.
Princip zahrnutý v této koncentraci bílkovin (nebo „skládání“) je izotachoforéza. Nastavuje se tak, že se na „separační gel“, který má jiné pH, vytvoří stohovací gel. Vzorek se aplikuje na stohovací gel a když se aplikuje elektrické pole, záporně nabité komplexy a menší ionty se pohybují směrem k anodě.
Separaci proteinů metody
Následuje stručný přehled některých běžných metod používaných pro proteinovou
separaci:
SDS-PAGE (SDS-polyakrylamidovém gelu) odděluje proteiny především
na základě molekulové hmotnosti, na rozdíl od náboje (což je ‚zaplavena out‘
By the přebytek SDS vázaného na protein) nebo skládání (proteiny jsou z velké části denaturovány v
SDS).
Protein sequencing
Co je proteinová elektroforéza?
Proteinová elektroforéza je standardní laboratorní technika, pomocí které jsou nabité molekuly proteinu transportovány skrz rozpouštědlo elektrickým polem. Proteiny i nukleové kyseliny lze oddělit elektroforézou, což je jednoduchý, rychlý a citlivý analytický nástroj. Většina biologických molekul nese čistý náboj při jakémkoli jiném pH než je jejich izoelektrický bod a bude migrovat rychlostí úměrnou jejich hustotě náboje. Mobilita molekuly v elektrickém poli bude záviset na následujících faktorech: síla pole, čistý náboj molekuly, velikost a tvar molekuly, iontová síla a vlastnosti matrice, přes kterou molekula migruje (např. Viskozita, Velikost pórů). Polyakrylamid a agaróza jsou dvě podpůrné matrice běžně používané v elektroforéze. Tyto matrice slouží jako porézní média a chovají se jako molekulární síto. Agaróza má velkou velikost pórů a je vhodná k separaci nukleových kyselin a velkých proteinových komplexů. Polyakrylamid má menší velikost pórů a je ideální pro separaci většiny proteinů a menších nukleových kyselin.
Existuje několik forem elektroforézy na polyakrylamidovém gelu (PAGE) a každá forma může poskytovat různé typy informací o požadovaných proteinech. Denaturace a redukce dodecylsulfátu sodného PAGE (SDS-PAGE) s diskontinuálním pufrovacím systémem je nejrozšířenější elektroforetickou technikou a separuje proteiny především hmotou. Nedenaturující PAGE, také nazývaná nativní PAGE, odděluje proteiny podle jejich poměru hmotnost/náboj. Dvourozměrná (2D) PAGE odděluje proteiny nativním izoelektrickým bodem v první dimenzi a hmotou v druhé dimenzi.
 myGel Mini Electrophoresis System |
|
BM0286 |
GenDepot |
System |
EUR 618 |
 CometAssay Electrophoresis Starter Kit |
|
4250-050-ESK |
Biotechne |
1 Kit |
EUR 3124.4 |
 ES Horizontal Electrophoresis Set |
|
LE1011 |
GenDepot |
Set |
EUR 482 |
 10-well protein Vertical Electrophoresis Apparatus |
|
EDK692 |
Bio Basic |
1 UNIT |
EUR 406.26 |
|
|
 electrophoresis ps 400v, 500ma, 50w |
|
EV1450 |
Consort |
ea |
EUR 479 |
electrophoresis ps 400v, 500ma, 50w |
|
EV1450-UK |
Consort |
ea |
EUR 479 |
electrophoresis ps 400v, 500ma, 50w |
|
EV1450-US |
Consort |
ea |
EUR 479 |
 electrophoresis ps 1500v, 300ma, 150w |
|
EV2230 |
Consort |
ea |
EUR 749 |
electrophoresis ps 1500v, 300ma, 150w |
|
EV2230-UK |
Consort |
ea |
EUR 749 |
electrophoresis ps 1500v, 300ma, 150w |
|
EV2230-US |
Consort |
ea |
EUR 749 |
 electrophoresis ps 300v, 1000ma, 150w |
|
EV2310 |
Consort |
ea |
EUR 572 |
electrophoresis ps 300v, 1000ma, 150w |
|
EV2310-UK |
Consort |
ea |
EUR 572 |
electrophoresis ps 300v, 1000ma, 150w |
|
EV2310-US |
Consort |
ea |
EUR 572 |
 electrophoresis ps 3000v, 150ma, 150w |
|
EV2320 |
Consort |
ea |
EUR 749 |
electrophoresis ps 3000v, 150ma, 150w |
|
EV2320-UK |
Consort |
ea |
EUR 749 |
electrophoresis ps 3000v, 150ma, 150w |
|
EV2320-US |
Consort |
ea |
EUR 749 |
 electrophoresis power supply uk plug |
|
EV245-UK |
Consort |
ea |
EUR 479 |
 electrophoresis power supply 120 vac |
|
EV245-US |
Consort |
ea |
EUR 479 |
