Abstraktní

Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti dodecylsulfátu sodného (SDS-PAGE) je velmi běžnou technikou používanou pro analýzu komplexních směsí polypeptidů. Má velké rozlišovací schopnosti, je rychlý a je vhodný pro bílkoviny kyselého nebo zásaditého pí. Poslední je, protože protein reaguje s SDS, který se váže na protein v přibližném poměru 1∶4∶1 (SDS: protein, w/w) a propůjčuje komplexu SDS-protein negativní náboj. Nabité komplexy se pohybují směrem k anodě, když jsou umístěny v elektrickém poli, a jsou odděleny na základě rozdílů v náboji a velikosti. SDS-PAGE se běžně používá k odhadu molekulových hmotností proteinů, ale odhady jsou přibližné (označují se jako „zjevné molekulové hmotnosti“) a někdy jsou náchylné k výrazné chybě.

Například k nepřiměřeně velkému zvýšení zjevné molekulové hmotnosti může dojít při kovalentní fosforylaci proteinu ( 1 ) nebo při umělém zachycení kyseliny fosforečné ( 2 ). Většina návrhů SDS-PAGE používá „stohovací gel“. Takový systém umožňuje koncentraci vzorků ze srovnatelně velkých objemů do velmi malých zón v gelu, čímž se získají úzké pásy různých proteinů, které jsou pak lépe rozlišeny.

Princip zahrnutý v této koncentraci bílkovin (nebo „skládání“) je izotachoforéza. Nastavuje se tak, že se na „separační gel“, který má jiné pH, vytvoří stohovací gel. Vzorek se aplikuje na stohovací gel a když se aplikuje elektrické pole, záporně nabité komplexy a menší ionty se pohybují směrem k anodě.

Separaci proteinů metody
Následuje stručný přehled některých běžných metod používaných pro proteinovou
separaci:
SDS-PAGE (SDS-polyakrylamidovém gelu) odděluje proteiny především
na základě molekulové hmotnosti, na rozdíl od náboje (což je ‚zaplavena out‘
By the přebytek SDS vázaného na protein) nebo skládání (proteiny jsou z velké části denaturovány v
SDS).

Protein sequencing

Protein sequencing

Co je proteinová elektroforéza?

Proteinová elektroforéza je standardní laboratorní technika, pomocí které jsou nabité molekuly proteinu transportovány skrz rozpouštědlo elektrickým polem. Proteiny i nukleové kyseliny lze oddělit elektroforézou, což je jednoduchý, rychlý a citlivý analytický nástroj. Většina biologických molekul nese čistý náboj při jakémkoli jiném pH než je jejich izoelektrický bod a bude migrovat rychlostí úměrnou jejich hustotě náboje. Mobilita molekuly v elektrickém poli bude záviset na následujících faktorech: síla pole, čistý náboj molekuly, velikost a tvar molekuly, iontová síla a vlastnosti matrice, přes kterou molekula migruje (např. Viskozita, Velikost pórů). Polyakrylamid a agaróza jsou dvě podpůrné matrice běžně používané v elektroforéze. Tyto matrice slouží jako porézní média a chovají se jako molekulární síto. Agaróza má velkou velikost pórů a je vhodná k separaci nukleových kyselin a velkých proteinových komplexů. Polyakrylamid má menší velikost pórů a je ideální pro separaci většiny proteinů a menších nukleových kyselin.

Existuje několik forem elektroforézy na polyakrylamidovém gelu (PAGE) a každá forma může poskytovat různé typy informací o požadovaných proteinech. Denaturace a redukce dodecylsulfátu sodného PAGE (SDS-PAGE) s diskontinuálním pufrovacím systémem je nejrozšířenější elektroforetickou technikou a separuje proteiny především hmotou. Nedenaturující PAGE, také nazývaná nativní PAGE, odděluje proteiny podle jejich poměru hmotnost/náboj. Dvourozměrná (2D) PAGE odděluje proteiny nativním izoelektrickým bodem v první dimenzi a hmotou v druhé dimenzi.

 

 

CometAssay Electrophoresis System

4250-050-ES 1 Kit
EUR 2950.8

myGel Mini Electrophoresis System

BM0286 System
EUR 618

Acrylamide, suitable for electrophoresis

GK5651-100G 100 g
EUR 54

Starch (Smithies), for electrophoresis

GE6857-1KG 1 kg
EUR 309

Starch (Smithies), for electrophoresis

GE6857-500G 500 g
EUR 181

CometAssay Electrophoresis Starter Kit

4250-050-ESK 1 Kit
EUR 3124.4

Agarose for DNA electrophoresis

16-0027-500 500 g
EUR 342

ES Horizontal Electrophoresis Set

LE1011 Set
EUR 482

6X6 well Electrophoresis Apparatus

EDK626 1 UNIT
EUR 625.5
  • Product category: Benchtop Equipment/Gel Electrophoresis/6x6-well Systems

10-well protein Vertical Electrophoresis Apparatus

EDK692 1 UNIT
EUR 406.26
  • Product category: Benchtop Equipment/Gel Electrophoresis/10-well Systems

electrophoresis ps 400v, 500ma, 50w

EV1450 ea
EUR 479

electrophoresis ps 400v, 500ma, 50w

EV1450-UK ea
EUR 479

electrophoresis ps 400v, 500ma, 50w

EV1450-US ea
EUR 479

electrophoresis ps 1500v, 300ma, 150w

EV2230 ea
EUR 749

electrophoresis ps 1500v, 300ma, 150w

EV2230-UK ea
EUR 749

electrophoresis ps 1500v, 300ma, 150w

EV2230-US ea
EUR 749

electrophoresis ps 300v, 1000ma, 150w

EV2310 ea
EUR 572

electrophoresis ps 300v, 1000ma, 150w

EV2310-UK ea
EUR 572

electrophoresis ps 300v, 1000ma, 150w

EV2310-US ea
EUR 572

electrophoresis ps 3000v, 150ma, 150w

EV2320 ea
EUR 749

electrophoresis ps 3000v, 150ma, 150w

EV2320-UK ea
EUR 749