Přímá PCR – soupravy Phire a Phusion

Co je přímá PCR?

Direct PCR (dPCR) je metoda amplifikace DNA přímo ze vzorku zvířecí nebo rostlinné tkáně bez provedení kroků izolace a purifikace DNA. Tato technika výrazně snižuje čas experimentu a náklady  na genotypizaci a velkoobjemové projekty . Poskytuje také lepší možnost, když čelíte výzvám amplifikace velmi malého množství vzorku, kde by krok čištění mohl potenciálně vést ke ztrátě vzorku.

V mnoha ohledech dPCR funguje jako konvenční PCR. Obě techniky závisí na templátové DNA, primerech a master mixu nebo reagentech PCR a obě používají k amplifikaci termální cyklovač. Primárním rozdílem mezi dPCR a konvenční PCR jsou přizpůsobené pufry používané v dPCR. Modifikované prvky dPCR umožňují robustní amplifikaci navzdory přítomnosti inhibitorů PCR, které se často nacházejí v surových vzorcích.

ALS SARS-CoV-2 RT-PCR 4G byl vyvinut a vyroben výhradně v ALS v Portugalsku a je určen hlavně pro export. Tato nová sada je schopna detekovat všechny známé varianty SARS-CoV-2, včetně britských, brazilských a jihoafrických variant, bez křížové reakce s jinými známými příbuznými viry nebo běžnými respiračními patogeny. Volba genomických oblastí použitých jako cíle a sekvence primerů a hydrolýzních sond byla založena na doporučeních WHO, CDC a DGS.

Souprava ALS SARS-CoV-2 RT-PCR 4G je   diagnostický zdravotnický prostředek in vitro (CE-IVD), který využívá technologii amplifikace nukleové kyseliny PCR v reálném čase pro detekci SARS-CoV-2 v klinických vzorcích z horních cest dýchacích trakt jednotlivců, u nichž může nebo nemusí existovat podezření na onemocnění COVID-19.

Souprava využívá techniku ​​RT-PCR, která kombinuje amplifikaci určitých oblastí virového genomu s detekcí specifickými hydrolýzními sondami. Cílové oblasti genomu SARS-CoV-2 jsou vysoce konzervativní a odpovídají dvěma specifickým genům: polyprotein ORF (gen ORF1ab) a nukleokapsidový fosfoprotein (gen N). Souprava může také detekovat gen, který kodifikuje strukturální protein obalu (gen E) specifický pro podrod Sarbecoviru.

Direct PCR Reagent

Výhody

• Rychlá amplifikace : Rychlost amplifikace polymerázy je 6 kb/min. 1 kB fragment může být amplifikován do 25 minut.
• Amplifikace dlouhého fragmentu:  U plazmidu, λ DNA a dalších jednoduchých templátů může polymeráza účinně zesílit> 20 kb. V případě genomu může polymeráza účinně zesílit> 8 kB. A pro cDNA může polymeráza účinně zesílit> 8 kB.
• Vysoká specifičnost:  S technologií horkého startu je polymeráza 100% neaktivní při teplotě nižší než 50 ° C a lze ji obnovit pouze zahřátím na 95 ° C po dobu 5 minut.
• Vysoká tolerance k nečistotám:  Vzorky plné krve, séra, kultivovaných buněk a moči lze přímo amplifikovat bez předchozího čištění DNA.

Definice jednotky

Jedna jednotka je definována jako množství enzymu potřebné ke katalýze inkorporace 10 nmol dNTP do látky nerozpustné v kyselině během 30 minut při 74 ° C.

[Linking template=“default“ type=“products“ search=“Direct PCR“ header=“3″ limit=“25″ start=“1″ showCatalogNumber=“true“ showSize=“true“ showSupplier=“true“ showPrice=“true“ showDescription=“true“ showAdditionalInformation=“true“ showImage=“true“ showSchemaMarkup=“true“ imageWidth=““ imageHeight=““]