Souprava pro stanovení lipidové peroxidace (MDA)

Souprava pro stanovení lipidové peroxidace (MDA + HNE)

Peroxidace lipidů je dobře známým příkladem oxidačního poškození buněčných membrán, lipoproteinů a dalších struktur obsahujících lipidy. Peroxidační modifikace nenasycených fosfolipidů, glykolipidů a cholesterolu může nastat v různých reakcích. Mohou být vyvolány i) druhy volných radikálů, jako jsou oxylové radikály, peroxylové radikály a hydroxylové radikály odvozené od redukce peroxidu vodíku zprostředkované železem, nebo ii) neradikálové druhy, jako je singletový kyslík, ozon a peroxynitrit generované reakcí superoxidu s oxidem dusnatým.

Malondialdehyd (MDA) a 4-hydroxyalkenaly jsou důležité toxické vedlejší produkty peroxidace lipidů. Měření množství takových aldehydů tedy odpovídá indexu peroxidace lipidů  in vitro  a  in vivo . 4-Hydroxynonenal (4-HNE) je hlavním produktem peroxidačního rozkladu ω-6 polynenasycených mastných kyselin (PUFA). Má cytotoxické, hepatotoxické, mutagenní a genotoxické vlastnosti. Kromě toho byly v podmínkách oxidačního stresu nalezeny zvýšené hladiny HNE v plazmě a různých orgánech. Ve skutečnosti je MDA v mnoha případech nejhojnějším individuálním aldehydem, který je výsledkem peroxidace lipidů. In vitro  MDA může měnit proteiny, DNA, RNA a mnoho dalších biomolekul.

Souprava LPO společnosti Bioquochem   měří koncentrace MDA a HNE jako index lipidové peroxidace. Za prvé, kyselinou katalyzovaný útok v poloze 3 indolového kruhu iniciuje reakce mezi indoly a aldehydy (MDA a HNE). Výsledkem této reakce je diindolylalkan (chromofor) s maximální absorbancí v oblasti 580-620 nm.

V našem testu indol (Reagent A) reaguje rychle s MDA a HNE v kyselém prostředí, čímž se získá chromofor (C) s vysokým molárním koeficientem extinkce při jeho maximální absorpční vlnové délce 586 nm.

• Přehled produktů

  Souprava pro stanovení lipidové peroxidace (MDA) (kolorimetrická/fluorometrická) (ab118970) poskytuje praktický nástroj pro citlivou detekci malondialdehydu (MDA).

  V protokolu testu lipidové peroxidace reaguje MDA ve vzorku s kyselinou thiobarbiturovou (TBA) za vzniku aduktu MDA-TBA. Adukt MDA-TBA lze snadno kvantifikovat kolorimetricky (OD = 532 nm) nebo fluorometricky (Ex/Em = 532/553 nm). Tento test detekuje hladiny MDA již od 1 nmol/jamku kolorimetricky a 0,1 nmol/jamku fluorometricky.

  Test MDA je také označován jako test TBARS.

  

  Souhrn protokolu testu peroxidace lipidů:
  -přidejte roztok TBA ke vzorkům a standardům, inkubujte 60 minut při 95 ° C, chladte 10 minut v ledové lázni
  -přeneste do jamek mikrodestičky
  -analyzujte čtečkou mikrodestiček
  Pro vyšší citlivost vysrážejte n-butanolem, centrifugujte, usušte a resuspendujte pelety před analýzou.

  K dispozici je čínský protokol.  Viz část protokoly níže.

  Pro alternativní test MDA bez kroků zahřívání požadovaných v testu TBARS zkuste test MDA ab233471.

• Poznámky

  Peroxidace lipidů se týká oxidační degradace lipidů. V tomto procesu odebírají volné radikály elektrony z lipidů (obecně v buněčných membránách), což vede k poškození buněk. Kvantifikace peroxidace lipidů je nezbytná pro posouzení oxidačního stresu. Lipidová peroxidace tvoří reaktivní aldehydy, jako je malondialdehyd (MDA) a 4-hydroxynonenal (4- HNE), jako přírodní bi-produkty. Malondialdehyd (MDA) a 4-hydroxynonenal (4-HNE) se často používají jako markery peroxidace lipidů a k testování na oxidační poškození / oxidační stres.

  Související produkty

  Prostudujte si marker oxidačního stresu a průvodce testem, nebo průvodce celým testem metabolismu, abyste se dozvěděli více o testech na metabolity, metabolické enzymy, mitochondriální funkce a oxidační stres a také o tom, jak testovat metabolické funkce v živých buňkách pomocí čtečky destiček.

  Podívejte se také na populární testovací sadu 4-HNE ab238538 jako alternativní marker peroxidace lipidů a oxidačního stresu.

  
  Jak ostatní vědci použili soupravu Lipid Peroxidation Assay Kit ab118970

  Testovací souprava MDA/TBARs byla použita v publikacích u různých typů vzorků, včetně:
  – Lidské: sérum ¹ , hippocampální primární buněčné extrakty ² , A375 kultivované buněčné lyzáty ³ , vzorky plazmy a destiček ⁴
  – Myš: neuronální buněčné lyzáty ⁵ , extrakt srdeční tkáně ⁶ , plazma ⁷ , buněčné extrakty ⁸
  – Krysa: extrakty hippocampální tkáně ⁹ , kardiomyocytové extrakty kultivovaných buněk ¹⁰ , plicní lyzáty ¹¹
  – Prase: sérum ¹²

  ^{Reference: 1 – Shen J et al. 2018, 2 – Wang Q a kol. 2019, 3 – Luo M a kol. 2018, 4 – Mustafa AG a kol. 2018, 5 – Murphy K et al. 2018, 6 – Guan F et al. 2019, 7 – Costa CRC a kol. 2018, 8 – Eleftheriadis T et al. 2019, 9 – Malekiyan et al. 2019, 10 – Zhou Z et al. 2018, 11 – Li L a kol. 2018, 12 – Lee SE a Kang KS 2019}

• Plošina

  Čtečka mikrodestiček

[Linking template=“default“ type=“products“ search=“Lipid Peroxidation “ header=“3″ limit=“21″ start=“2″ showCatalogNumber=“true“ showSize=“true“ showSupplier=“true“ showPrice=“true“ showDescription=“true“ showAdditionalInformation=“true“ showImage=“true“ showSchemaMarkup=“true“ imageWidth=““ imageHeight=““]